in vitro translation

трансляция in vitro

Бесклеточный синтез белка «в пробирке» с использованием очищенной мРНК и необходимых для трансляции факторов (субъединицы рибосом, АТФ, фактора трансляции и др.); к настоящему времени системы Т.i.v. созданы для прокариот (E.coli; Bacillus stearothermophilus) и эукариот (ретикулоциты кролика и др.), а также сформированы сопряженные системы транскрипции и Т.i.v., в которых синтезированная мРНК транслируется рибосомами, находящимися в той же бесклеточной системе.

* * *

In vitro трансляция — . — метод трансляции изолированной и очищенной иРНК в соответствующий белок in vitro. Для этого иРНК смешивается с клеточным экстрактом из E. coli (для прокариотной иРНК) или с лизатом ретикулоцитов кролика, зародышей пшеницы (для эукариотной иРНК). Такой экстракт практически лишен эндогенной РНК, но в нем есть рибосомные субъединицы (см. Рибосома), все тРНК, аминоацил-тРНК-синтетазы, белки инициации, транслокации, элонгации, трансляционные факторы, аминокислоты, источники энергии (АТФ, ГТФ и др.). Если в экстракт добавлять радиоактивно меченные аминокислоты, то образующиеся полипептиды будут радиоактивными и легко обнаруживаемыми при электрофорезе в полиакриламидном геле и флюорографии.